Cell Culture and Cell Viability Assessment Using the MTT Assay

Abstract

Film instruktażowy stanowi wprowadzenie do podstaw hodowli komórkowej. Dokument skierowany jest do osób rozpoczynających pracę w laboratorium hodowli komórkowej, omawia podstawy hodowli komórkowej: dobór odpowiedniej linii komórkowej, środowisko hodowli oraz morfologię komórek. Najbardziej praktyczna część zawiera szczegółowy protokół metodyczny wraz z odczynnikami (podłoża hodowlane, surowice, odczynniki laboratoryjne, antybiotyki, odczynniki do wykonania testu przeżywalności MTT, który opiera się na zdolności aktywnych metabolicznie komórek do redukcji żółtej soli tetrazolowej MTT do nierozpuszczalnych kryształów formazanu. Ilość powstałego formazanu jest proporcjonalna do liczby żywych komórek i może zostać oznaczona spektrofotometrycznie po jego rozpuszczeniu. Test MTT znajduje szerokie zastosowanie w badaniach cytotoksyczności, proliferacji komórek oraz ocenie skuteczności nowych leków i materiałów biomedycznych. Celem filmu jest omówienie podstawowych zasad prowadzenia hodowli komórkowej oraz przedstawienie metody MTT jako narzędzia służącego do oceny przeżywalności komórek. Dokument opisuje zarówno wymagania dotyczące bezpiecznej i sterylnej pracy z kulturami komórkowymi, jak i zasadę działania, przebieg oraz zastosowania testu MTT w badaniach laboratoryjnych.

This instructional video introduces the basics of cell culture and is intended for those starting work in a cell culture laboratory. It covers core topics such as selecting an appropriate cell line, the culture environment, and cell morphology, along with detailed protocols and required reagents (culture media, sera, laboratory reagents, and antibiotics). As a supplementary topic, the video also introduces the MTT assay, a method for assessing cell viability based on the ability of metabolically active cells to reduce the yellow tetrazolium salt MTT into insoluble purple formazan crystals. The amount of formazan formed is proportional to the number of live cells and can be quantified spectrophotometrically after dissolution. The MTT assay is widely used in cytotoxicity studies, cell proliferation assays, and evaluation of new drugs and biomaterials.